怀孕三个月可以喝茶吗？
茶叶中含有多种生物活性物质，如咖啡因、多酚类化合物等，对机体具有广泛的生理效应[1]。但是目前关于妊娠期适量饮茶的生物学效应及其安全性尚不明确，本研究旨在通过动物实验阐明妊娠期饮用不同浓度绿茶的生物学效应及相关机制。 材料和方法： （一）实验动物 健康纯系昆明小鼠72只，6周龄，体重（18±2）g；由南方医科大学实验动物中心提供。
（二）主要试剂及仪器 胎牛血清和RPMI-1640培养液为Gibco公司产品；胰蛋白酶为Sigma公司产品；青霉素/链霉素为华北制药集团化学制药有限公司产品；二甲基亚砜为上海国药集团化学试剂有限公司产品；DMEM/F12培养基和胰蛋白酶为Hyclone公司产品；胎牛血清购自北京元亨祥血液科技有限公司；二甲基亚矾为TCI公司产品；Triton X-100 为Amresco公司产品；PBS缓冲液购自碧云天公司；DAPI为Invitrogen公司产品；羊抗兔IgG、二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品;TrizolTM RNA提取试剂盒和小量RNA抽提试剂盒为Takara公司产品；RT-PCR试剂盒为Fermentas公司产品；荧光定量PCR试剂盒为TaKaRa公司产品；引物由赛百盛公司合成；倒置相差显微镜为Olympus公司产品；酶标仪为BioRad公司产品；凝胶成像系统为Syngene公司产品；超低温冰箱为Thermo Fisher Scientific公司产品；荧光显微镜为Nikon公司产品；实时荧光定量PCR仪为ABI公司的Applied Biosystems 7500型。
（三）实验方法与步骤 1.小鼠分组与处理 将72只小鼠随机分为对照组（C，n=24）、低浓度绿茶组（L，n=24）和中浓度绿茶组（M，n=24）3个组。除对照组外各组于妊娠第0～11天每天灌胃给予相应浓度的绿茶溶液（用含0．02%Tween－80的蒸馏水配制成一定浓度，L组为0．9mg／mL，M组为3．1mg／mL），每组6只小鼠。对照组小鼠每日予等体积的蒸馏水灌胃。
2.胚胎标本采集及处理 小鼠于妊娠第11天末处死取胚胎。取出胚胎后置于含有预冷PBS的培养皿内，洗去残留母血，将发育至不同时期的胚胎分别称重并计数。按以下标准进行分类：早期胚胎：胚泡期或卵裂期；晚期胚胎：桑椹期至囊胚期。
3.免疫组织化学 参照试剂说明书，采用二步法进行免疫组化染色，一抗工作浓度分别为：CDX2（1∶200）、GFAP（1∶200）、Nestin（1∶200）、β-catenin（1∶200）、p-c-Jun N-terminal Kinase(JNK)(1∶200)、phospho-extracellular signal regulated kinases (ERKs， p-ERKs )（1：200）、磷酸化蛋白激酶 B (PKB ， P-AKT ; P-AMPK， phosphorylated AMPactivated protein kinase ; P-mTOR ， mTOR )（1∶50）。 以磷酸甘油醛脱氢酶作为阳性反应对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，所有切片均在相同条件下进行染色，结果以细胞胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性。
4.Western blot检测 在冰浴的条件下，收集1×106个胚胎组织样品，加入预冷的蛋白裂解液（包含蛋白酶抑制剂）充分振荡匀浆，4℃下12，000 g离心15min，取上清。BCA蛋白定量后，采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离（SDS－PAGE），然后转移至硝酸纤维素膜。5％牛血清白蛋白溶液封闭非特异性蛋白后，依次加入一抗（anti-β-actin，1：3000稀释；anti-CDX2， anti-GFAP， anti-Nestin， anti-β catenin， anti-JNK， anti-p-JNK， anti-Erk1/2， anti-p-Erk1/2， anti-AMPKαl， anti-p-AMPKαl， anti-mTOR， anti-p-mTOR， all diluted to 1：200 in PBS with 5 % nonfat milk at room temperature for two hours， then the membrane was incubated with HRP-conjugate secondary antibody for one hour at RT. Chemiluminescent detection of proteins were performed by using a Western Blotting Luminometer (ECL Plus reagents， Amersham) according to manufacturer‘s protocol. GAPDH was used as an internal control），最后加辣根过氧化物酶标记的二抗，用化学发光法进行检测，X胶片曝光、显影